色譜(pu)柱(zhu)的維(wei)護(hu)保(bao)養(yang)

註(zhu)意(yi)事(shi)項
色譜(pu)柱(zhu) [2]  的正(zheng)確使用(yong)和(he)維(wei)護(hu)十(shi)分重(zhong)要，稍有不(bu)慎(shen)就會降(jiang)低柱(zhu)效、縮短使用(yong)壽命甚(shen)至(zhi)損壞。在色譜(pu)操作(zuo)過(guo)程中，需要註(zhu)意(yi)下列(lie)問(wen)題，以維(wei)護(hu)色(se)譜(pu)柱(zhu)。
①　避(bi)免壓(ya)力(li)和(he)溫度(du)的急(ji)劇(ju)變(bian)化及任(ren)何機械震(zhen)動。溫(wen)度(du)的突(tu)然(ran)變(bian)化或(huo)者(zhe)使色(se)譜(pu)柱(zhu)從(cong)高處(chu)掉(diao)下都會影(ying)響柱(zhu)內(nei)的填充(chong)狀(zhuang)況(kuang)；柱(zhu)壓的突(tu)然(ran)升(sheng)高或(huo)降(jiang)低也會沖動柱(zhu)內(nei)填料，因(yin)此在調節流(liu)速時(shi)應(ying)該(gai)緩慢(man)進行，在閥進樣(yang)時(shi)閥的轉動不(bu)能(neng)過(guo)緩（如(ru)前(qian)所(suo)述(shu)）。
②　應(ying)逐漸(jian)改變(bian)溶(rong)劑(ji)的組(zu)成，特別是(shi)反相色(se)譜(pu)中，不應(ying)直(zhi)接從(cong)有(you)機溶(rong)劑(ji)改變(bian)為(wei)全(quan)部(bu)是(shi)水(shui)，反之亦(yi)然(ran)。
③　壹(yi)般(ban)說來色(se)譜(pu)柱(zhu)不能(neng)反沖，只有(you)生產(chan)者(zhe)指明該(gai)柱(zhu)可以反沖時(shi)，才可以反沖除(chu)去留在柱(zhu)頭(tou)的雜質。否則(ze)反沖會迅(xun)速降(jiang)低柱(zhu)效。
④　選(xuan)擇使(shi)用適(shi)宜的流(liu)動相(xiang)（尤(you)其是(shi)pH），以避(bi)免固(gu)定(ding)相被破(po)壞(huai)。有(you)時(shi)可以在進樣(yang)器(qi)前(qian)面(mian)連接壹預柱(zhu)，分析(xi)柱(zhu)是(shi)鍵(jian)合矽(gui)膠時，預(yu)柱(zhu)為(wei)矽(gui)膠，可使流(liu)動相(xiang)在進入(ru)分析(xi)柱(zhu)之前(qian)預(yu)先(xian)被矽(gui)膠“飽(bao)和(he)”，避(bi)免分析(xi)柱(zhu)中的矽(gui)膠基質被溶(rong)解(jie)。
⑤　避(bi)免將基質復雜的樣(yang)品尤其是(shi)生(sheng)物樣(yang)品直接註入(ru)柱(zhu)內(nei)，需要對(dui)樣(yang)品進行預(yu)處(chu)理(li)或(huo)者(zhe)在進樣(yang)器(qi)和(he)色譜(pu)柱(zhu)之間連(lian)接壹保(bao)護(hu)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)壹般(ban)是(shi)填有(you)相(xiang)似(si)固(gu)定(ding)相的短柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)可以而(er)且(qie)應(ying)該(gai)經(jing)常(chang)更(geng)換。
⑥　經(jing)常(chang)用強(qiang)溶(rong)劑(ji)沖洗(xi)色(se)譜(pu)柱(zhu)，清(qing)除(chu)保(bao)留在柱(zhu)內(nei)的雜質。在進行清(qing)洗(xi)時，對(dui)流(liu)路(lu)系統(tong)中流(liu)動相(xiang)的置換(huan)應(ying)以相(xiang)混溶(rong)的溶(rong)劑(ji)逐漸(jian)過(guo)渡，每種流(liu)動相(xiang)的體(ti)積應是(shi)柱(zhu)體積的20倍(bei)左(zuo)右(you)，即(ji)常(chang)規(gui)分析(xi)需要50~75ml。
下(xia)面(mian)列舉壹些(xie)色(se)譜(pu)柱(zhu)的清(qing)洗(xi)溶(rong)劑(ji)及順(shun)序，作(zuo)為(wei)參考(kao)：矽(gui)膠柱(zhu)以正(zheng)已烷（或(huo)庚(geng)烷(wan)）、二(er)氯甲烷和(he)甲醇依(yi)次沖洗(xi)，然(ran)後(hou)再(zai)以相(xiang)反順序依(yi)次沖洗(xi)，所(suo)有(you)溶(rong)劑(ji)都必須嚴(yan)格(ge)脫水(shui)。甲醇能(neng)洗(xi)去殘(can)留的強(qiang)極(ji)性雜質，已烷使(shi)矽(gui)膠表面(mian)重新活(huo)化。反相柱(zhu)以水(shui)、甲醇、乙腈(jing)、壹(yi)氯甲烷（或(huo)氯仿）依(yi)次沖洗(xi)，再(zai)以相(xiang)反順序依(yi)次沖洗(xi)。如(ru)果下壹步(bu)分析(xi)用的流(liu)動相(xiang)不(bu)含(han)緩沖液，那麽(me)可以省(sheng)略zui後(hou)用(yong)水(shui)沖洗(xi)這(zhe)壹(yi)步(bu)。壹氯甲烷能(neng)洗(xi)去殘(can)留的非(fei)極(ji)性雜質，在甲醇（乙腈(jing)）沖洗(xi)時(shi)重(zhong)復(fu)註射(she)100~200μl四(si)氫(qing)呋(fu)喃(nan)數(shu)次有(you)助(zhu)於(yu)除去強疏(shu)水(shui)性雜質。四(si)氫(qing)呋(fu)喃(nan)與(yu)乙腈(jing)或(huo)甲醇的混(hun)合溶(rong)液能(neng)除(chu)去類(lei)脂。有時(shi)也註(zhu)射(she)二(er)甲亞碸數(shu)次。此外，用乙腈(jing)、丙(bing)酮和(he)三氟(fu)醋(cu)酸(suan)（0.1%）梯(ti)度(du)洗(xi)脫能(neng)除(chu)去蛋白質汙染。
陽(yang)離子(zi)交換柱(zhu)可用稀(xi)酸(suan)緩沖液沖洗(xi)，陰(yin)離子(zi)交換柱(zhu)可用稀(xi)堿(jian)緩沖液沖洗(xi)，除(chu)去交換性能(neng)強(qiang)的鹽(yan)，然(ran)後(hou)用(yong)水(shui)、甲醇、二(er)氯甲烷（除(chu)去吸附在固(gu)定(ding)相表(biao)面(mian)的有(you)機物）、甲醇、水(shui)依(yi)次沖洗(xi)。
⑦　保(bao)存(cun)色譜(pu)柱(zhu)時應(ying)將柱(zhu)內(nei)充(chong)滿乙腈(jing)或(huo)甲醇，柱(zhu)接頭(tou)要擰緊(jin)，防(fang)止(zhi)溶(rong)劑(ji)揮發幹(gan)燥。禁(jin)止(zhi)將緩沖溶(rong)液留在柱(zhu)內(nei)靜置過(guo)夜(ye)或(huo)更(geng)長時(shi)間。
⑧　色(se)譜(pu)柱(zhu)使用(yong)過(guo)程中，如(ru)果壓力升(sheng)高，壹(yi)種(zhong)可能(neng)是(shi)燒結濾(lv)片被堵塞，這(zhe)時(shi)應更(geng)換濾(lv)片或(huo)將其取出進行清(qing)洗(xi)；另壹種(zhong)可能(neng)是(shi)大分子(zi)進入(ru)柱(zhu)內(nei)，使柱(zhu)頭(tou)被汙染；如(ru)果柱(zhu)效降低或(huo)色(se)譜(pu)峰變(bian)形，則(ze)可能(neng)柱(zhu)頭(tou)出現塌(ta)陷(xian)，死體積增大。
在後(hou)兩(liang)種情(qing)況發生(sheng)時(shi)，小心擰開柱(zhu)接頭(tou)，用(yong)潔(jie)凈(jing)小鋼(gang)將柱(zhu)頭(tou)填料取出1~2mm高度(du)（註(zhu)意把被汙染填料取凈(jing)）再把(ba)柱(zhu)內(nei)填料整(zheng)平(ping)。然(ran)後(hou)用(yong)適當(dang)溶(rong)劑(ji)濕潤(run)的固(gu)定(ding)相（與(yu)柱(zhu)內(nei)相同）填滿(man)色(se)譜(pu)柱(zhu)，壓平(ping)，再(zai)擰緊(jin)柱(zhu)接頭(tou)。這(zhe)樣(yang)處(chu)理(li)後(hou)柱(zhu)效能(neng)得(de)到(dao)改(gai)善(shan)，但(dan)是(shi)很(hen)難(nan)恢(hui)復(fu)到新柱(zhu)的水(shui)平(ping)。
柱(zhu)子(zi)失(shi)效通常(chang)是(shi)柱(zhu)端部(bu)分，在分析(xi)柱(zhu)前(qian)裝(zhuang)壹(yi)根(gen)與(yu)分析(xi)柱(zhu)相同(tong)固(gu)定(ding)相的短柱(zhu)（5~30mm），可以起(qi)到保(bao)護(hu)、延(yan)長(chang)柱(zhu)壽命的作(zuo)用(yong)。采用保(bao)護(hu)柱(zhu)會損失壹(yi)定(ding)的柱(zhu)效，這(zhe)是(shi)值得(de)的。
通(tong)常(chang)色譜(pu)柱(zhu)壽命在正確使用(yong)時(shi)可達2年以上。以矽(gui)膠為(wei)基質的填料，只能(neng)在pH2~9範(fan)圍(wei)內(nei)使用。柱(zhu)子(zi)使(shi)用壹(yi)段時間後(hou)，可能(neng)有(you)壹(yi)些(xie)吸附作(zuo)用(yong)強(qiang)的物質保(bao)留於(yu)柱(zhu)頂，特別是(shi)壹(yi)些(xie)有(you)色物質更(geng)易看清(qing)被吸著在柱(zhu)頂的填料上。新的色(se)譜(pu)柱(zhu)在使用壹段時間後(hou)柱(zhu)頂填料可能(neng)塌(ta)陷(xian)，使柱(zhu)效下降，這(zhe)時(shi)也可補加(jia)填料使柱(zhu)效恢(hui)復(fu)。
每次工作(zuo)完(wan)後(hou)，用(yong)洗脫能(neng)力(li)強(qiang)的洗(xi)脫液沖洗(xi)，例(li)如(ru)ODS柱(zhu)宜用(yong)甲醇沖洗(xi)至(zhi)基線(xian)平(ping)衡(heng)。當(dang)采用鹽(yan)緩沖溶(rong)液作(zuo)流(liu)動相(xiang)時(shi)，使(shi)用完後(hou)應(ying)用無(wu)鹽流(liu)動相(xiang)沖洗(xi)。含(han)鹵(lu)族元素(su)（氟(fu)、氯、溴）的化合物可能(neng)會腐(fu)蝕不(bu)銹(xiu)鋼(gang)管道，不宜長(chang)期與(yu)之(zhi)接觸。裝在HPLC儀上柱(zhu)子(zi)如(ru)不經常(chang)使用(yong)，應(ying)每隔4~5天(tian)開機沖洗(xi)15分鐘。