液相色譜柱使用前應(ying)該如何(he)維(wei)護(hu)？

 

1、使用前認(ren)真(zhen)閱(yue)讀色譜(pu)柱(zhu)的說明(ming)書，了(le)解(jie)色(se)譜(pu)柱的種類，選(xuan)用合適的色(se)譜(pu)柱(zhu)。

在(zai)選(xuan)用色譜柱時(shi)，應(ying)充分(fen)考慮(lv)所(suo)分(fen)析樣品的極(ji)性(xing)大小(xiao)、化(hua)合物的種類數(shu)量、結(jie)構(gou)特(te)征(zheng)。根(gen)據化(hua)合物的性(xing)質(zhi)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的色譜柱和(he)分(fen)析條(tiao)件。不(bu)同(tong)類(lei)型的(de)色譜(pu)柱使用的流動(dong)相不同，使用錯誤的流動(dong)相會降低(di)柱效(xiao)，損(sun)傷(shang)柱(zhu)子(zi)。如分(fen)析極(ji)性(xing)較大的(de)多糖類成(cheng)分(fen)，應當(dang)采用親水性(xing)的反(fan)相填料。對(dui)於首(shou)次使用的色譜柱(zhu)，還應按(an)照(zhao)廠家的(de)出(chu)廠說(shuo)明對(dui)色(se)譜柱進行(xing)低(di)流速的沖洗活(huo)化(hua)，活(huo)化(hua)後(hou)的(de)色(se)譜(pu)填料共(gong)價鍵(jian)鍵(jian)合力(li)增強，柱效(xiao)提高，壽(shou)命(ming)延長(chang)。

 

2、樣品的準(zhun)備(bei)與預(yu)處(chu)理

我們(men)的經(jing)驗是樣品純化(hua)得(de)越幹(gan)凈(jing)，色(se)譜柱的(de)使用壽命(ming)越長(chang)。許(xu)多樣品，尤其(qi)是生(sheng)物樣品，組份(fen)非(fei)常(chang)復雜，對(dui)色(se)譜柱的損(sun)傷(shang)性(xing)較大，不(bu)經(jing)預(yu)處(chu)理的樣品直接(jie)分(fen)析，會(hui)嚴重(zhong)縮短色(se)譜(pu)柱的使用壽命(ming)。因此，在(zai)樣品的準(zhun)備(bei)時(shi)需對(dui)樣品進行(xing)預(yu)處(chu)理，包括(kuo)準備(bei)溶劑(ji)的選(xuan)擇(ze)、樣品過(guo)濾(lv)等。

 

2.1 制(zhi)樣溶(rong)劑(ji)的選(xuan)擇(ze)

制(zhi)樣溶(rong)劑(ji)通(tong)常(chang)需要考慮(lv)樣品的溶(rong)解性(xing)、與流(liu)動(dong)相的相溶性(xing)、色譜(pu)填(tian)料的(de)適(shi)用性(xing)等方面(mian)。這(zhe)類溶劑需對(dui)樣品有較大的(de)溶(rong)解性(xing)，而且(qie)與(yu)流動(dong)相溶，洗脫強度(du)最(zui)好低(di)於流動(dong)相或梯度(du)洗脫(tuo)中(zhong)的(de)起(qi)始流(liu)動(dong)相，以(yi)免影(ying)響(xiang)樣品分(fen)離(li)。目(mu)前許(xu)多手性(xing)色譜(pu)柱(zhu)都禁(jin)止(zhi)使用DMSO、四(si)氫呋喃、氯仿等溶(rong)解(jie)樣品，這些(xie)溶(rong)劑(ji)會破(po)壞(huai)固定相的結構(gou)，從而縮短色(se)譜(pu)柱的使用壽命(ming)。此外(wai)，制(zhi)樣溶(rong)劑(ji)還應與色譜系(xi)統其他(ta)部件如高壓(ya)泵(beng)、進樣器等(deng)相適用。

 

2.2 制(zhi)樣溶(rong)劑(ji)過(guo)濾(lv)

在(zai)進樣前需過(guo)濾(lv)樣品溶液，如采用0.22μm的微孔(kong)濾(lv)膜除去(qu)不(bu)溶性(xing)微粒(li)，以(yi)免堵塞(sai)柱頭(tou)濾(lv)片及(ji)柱(zhu)內填(tian)充床。在(zai)條(tiao)件允(yun)許的情況(kuang)下(xia)，最(zui)好采用與色譜柱(zhu)同(tong)種填料的(de)固相萃取(qu)柱過(guo)濾(lv)進樣溶(rong)液，可以(yi)減少(shao)在(zai)色譜柱上(shang)死吸附(fu)的(de)物質(zhi)或(huo)易堵塞(sai)的大分(fen)子樣品。如生(sheng)物樣品中(zhong)的(de)小(xiao)極(ji)性(xing)的油(you)脂(zhi)類易於沈澱(dian)死吸附(fu)在(zai)C18反(fan)相色譜柱中(zhong)，導(dao)致柱效(xiao)降低(di)、柱壓(ya)升(sheng)高。采用SPE柱過(guo)濾(lv)後(hou)，可以(yi)有效(xiao)減少(shao)在(zai)色譜柱中(zhong)附(fu)著(zhe)沈積的死吸附(fu)成(cheng)分(fen)，保(bao)護(hu)色譜(pu)柱不(bu)被汙染(ran)，保(bao)證(zheng)其使用壽命(ming)。

 

 

2.3 其他(ta)，如溶(rong)液濃度(du)、進樣量等(deng)

分(fen)析物(wu)的某些(xie)性(xing)質(zhi)同(tong)樣能影(ying)響(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)使用壽命(ming)。強酸(suan)、強堿性(xing)物質(zhi)和(he)蛋白(bai)質(zhi)類(lei)生(sheng)物大分(fen)子，它(ta)們(men)能與固定相填料作(zuo)用，或生(sheng)成(cheng)不可逆(ni)吸(xi)附(fu)層(ceng)，改(gai)變填料表面(mian)特(te)征(zheng)，使色(se)譜(pu)柱性(xing)能發生(sheng)變化(hua)，最(zui)終(zhong)導(dao)致分(fen)離(li)失(shi)效(xiao)。此外(wai)樣品的進(jin)樣量過(guo)大、超載都會影(ying)響(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)分(fen)離(li)性(xing)能和使用壽命(ming)。