高效液相色(se)譜(pu)柱的(de)維(wei)護和保養方(fang)法有(you)哪些?

 

壹(yi)、使(shi)用(yong)前(qian)：做好(hao)預(yu)處(chu)理(li)，從(cong)源(yuan)頭(tou)保(bao)護(hu)色譜(pu)柱

 

柱(zhu)活化與(yu)平衡：新(xin)柱或(huo)閑(xian)置超過1周(zhou)的(de)色(se)譜(pu)柱，使(shi)用(yong)前(qian)需(xu)用(yong)流動相平衡30-60分鐘（流速1.0mL/min），確(que)保固(gu)定(ding)相充分浸潤(run)；反相柱(zhu)（如C18）可(ke)先用(yong)甲醇/水(shui)（90:10）沖(chong)洗20柱體(ti)積，再(zai)切換(huan)至樣品(pin)流動相，避(bi)免(mian)固(gu)定(ding)相幹燥(zao)導致(zhi)性能(neng)下(xia)降(jiang)。若柱(zhu)內保存(cun)溶(rong)劑(ji)與(yu)流動相不(bu)兼容(rong)（如正相柱(zhu)用正己烷(wan)保(bao)存(cun)，流動相為(wei)甲醇(chun)），需(xu)用(yong)過渡溶(rong)劑(ji)梯度沖(chong)洗，防止(zhi)溶(rong)劑(ji)互溶(rong)產生氣(qi)泡或(huo)固(gu)定(ding)相塌(ta)陷(xian)。

 

樣品(pin)與(yu)流動相凈化：樣品(pin)必須經0.22μm濾(lv)膜過濾，去(qu)除(chu)顆粒(li)物(wu)、懸浮物(wu)，避(bi)免(mian)堵塞柱(zhu)篩(shai)板；含高沸點雜(za)質、蛋白(bai)、油脂(zhi)的樣品(pin)需(xu)提(ti)前(qian)通(tong)過固(gu)相萃(cui)取（SPE）等(deng)方(fang)法凈化，防止(zhi)雜質吸附在(zai)固(gu)定(ding)相上(shang)。流動相需(xu)超聲脫(tuo)氣(qi)15-20分鐘，去(qu)除(chu)氣(qi)泡（氣(qi)泡會(hui)導致(zhi)柱(zhu)壓(ya)波(bo)動、峰(feng)形異常）；使(shi)用(yong)緩(huan)沖(chong)鹽(yan)流動相時，需(xu)用(yong)高純度水(shui)（如超純水(shui)）配制(zhi)，過濾後(hou)現配現用，避(bi)免(mian)鹽(yan)類結(jie)晶堵塞色(se)譜(pu)柱。

 

儀(yi)器狀(zhuang)態檢(jian)查(zha)：安(an)裝(zhuang)色(se)譜(pu)柱前(qian)，清(qing)理(li)進(jin)樣口襯管、更換老(lao)化隔墊，避(bi)免(mian)隔(ge)墊(dian)碎屑(xie)、樣品(pin)殘留進(jin)入(ru)柱(zhu)內(nei)；檢(jian)查(zha)管(guan)路(lu)是否有泄(xie)漏、堵塞，確(que)保柱(zhu)前(qian)壓(ya)力(li)穩(wen)定(ding)；確(que)認柱接(jie)頭(tou)密(mi)封良(liang)好(hao)，選用匹(pi)配的石(shi)墨墊，避(bi)免(mian)載氣(qi)泄(xie)漏或(huo)壓(ya)力(li)不(bu)均(jun)導致(zhi)柱(zhu)損(sun)傷。

 

二、使(shi)用(yong)中：規範操作，避(bi)免(mian)柱(zhu)損(sun)傷

 

溫(wen)度與(yu)壓(ya)力(li)控(kong)制(zhi)：嚴格遵守色(se)譜(pu)柱最(zui)高使(shi)用(yong)溫度（反相柱(zhu)通(tong)常≤60℃，正相柱(zhu)≤80℃），避(bi)免(mian)高(gao)溫(wen)加(jia)速(su)固(gu)定(ding)相流失；柱壓(ya)需(xu)控(kong)制(zhi)在(zai)出(chu)廠(chang)推薦範圍（通(tong)常≤40MPa），若壓(ya)力(li)突(tu)然(ran)升(sheng)高超過30%，需(xu)立(li)即(ji)停機(ji)排查(zha)（如過濾流動相、清(qing)洗進(jin)樣口），避(bi)免(mian)壓(ya)力(li)過(guo)高(gao)導致(zhi)固(gu)定(ding)相壓(ya)實(shi)、柱床塌(ta)陷(xian)。升(sheng)溫速(su)率建(jian)議(yi)≤10℃/min，避(bi)免(mian)溫(wen)度驟升(sheng)驟降(jiang)破(po)壞柱(zhu)結(jie)構(gou)。

 

流動相使(shi)用(yong)規範：避(bi)免(mian)使(shi)用(yong)強(qiang)腐(fu)蝕性溶(rong)劑(ji)（如濃(nong)鹽(yan)酸、氫氧(yang)化鈉(na)），反相柱(zhu)流動相pH範圍需(xu)控(kong)制(zhi)在(zai)2-8（特殊耐(nai)酸堿柱(zhu)除(chu)外(wai)），超出(chu)範圍會(hui)導致(zhi)矽(gui)膠(jiao)基質溶(rong)解(jie)、固(gu)定(ding)相水(shui)解(jie)。梯(ti)度洗脫(tuo)時，有(you)機(ji)相比例變化不宜(yi)過快（如每分鐘變化≤10%），避(bi)免(mian)固(gu)定(ding)相急劇(ju)收縮(suo)或膨(peng)脹(zhang)；含緩(huan)沖(chong)鹽(yan)的流動相使(shi)用(yong)後(hou)，需(xu)及(ji)時用(yong)高比例水(shui)相沖(chong)洗，防止(zhi)鹽(yan)類結(jie)晶。

 

進(jin)樣操作要求(qiu)：進(jin)樣量需(xu)匹(pi)配柱容(rong)量（常規C18柱(zhu)進(jin)樣量≤20μL），避(bi)免(mian)過(guo)載導致(zhi)峰(feng)形拖尾、固(gu)定(ding)相汙(wu)染；進(jin)樣口溫(wen)度設置(zhi)合理，高於樣品(pin)最(zui)高沸點10-20℃，但(dan)不(bu)超過柱(zhu)最(zui)高使(shi)用(yong)溫度，防止(zhi)樣品(pin)分解(jie)產生雜質汙染色譜(pu)柱。避(bi)免(mian)連(lian)續進(jin)樣高濃(nong)度、高(gao)汙染樣品(pin)，建(jian)議(yi)每進(jin)樣10-20針後(hou)，用(yong)空(kong)白(bai)流動相沖(chong)洗10-15柱體(ti)積。

 

三(san)、使(shi)用(yong)後(hou)：及(ji)時清(qing)洗，延長(chang)柱(zhu)壽(shou)命

 

常規清(qing)洗流程：實驗(yan)結(jie)束(shu)後(hou)，用(yong)流動相梯(ti)度沖(chong)洗色譜(pu)柱，去(qu)除(chu)殘(can)留(liu)樣品(pin)和雜質。反相柱(zhu)：先用(yong)甲(jia)醇(chun)/水(shui)（50:50）沖(chong)洗20柱體(ti)積，再(zai)用純(chun)甲醇或乙腈(jing)沖(chong)洗30柱體(ti)積，去(qu)除(chu)強(qiang)吸(xi)附性雜質；正相柱(zhu)：用正己烷(wan)/異(yi)丙(bing)醇(chun)（90:10）沖(chong)洗20柱體(ti)積，再(zai)用純(chun)正己烷(wan)保(bao)存(cun)。若樣品(pin)含蛋白(bai)、油脂(zhi)等(deng)難洗脫(tuo)雜質，可(ke)在(zai)清洗流程中加(jia)入(ru)5-10%的(de)四(si)氫(qing)呋喃（THF），增強(qiang)洗脫(tuo)效果(guo)，但(dan)需(xu)註(zhu)意THF對(dui)部(bu)分固(gu)定(ding)相的(de)兼容(rong)性。

 

特殊汙(wu)染處(chu)理(li)：若柱(zhu)壓(ya)升(sheng)高、峰(feng)形拖尾嚴重(zhong)，可(ke)能(neng)是柱內汙(wu)染，可(ke)進(jin)行(xing)深度清(qing)洗。反相柱(zhu)：用甲(jia)醇(chun)→甲(jia)醇/THF（80:20）→甲醇→乙腈(jing)的順(shun)序梯度沖(chong)洗，每步20柱(zhu)體(ti)積；正相柱(zhu)：用正己烷(wan)→正己烷(wan)/乙酸乙酯（50:50）→正己烷(wan)沖(chong)洗。禁(jin)止(zhi)用強(qiang)極性溶(rong)劑(ji)（如丙酮、二氯甲(jia)烷）沖(chong)洗正相柱(zhu)，避(bi)免(mian)固(gu)定(ding)相流失。

 

保存(cun)方(fang)法：短期保存(cun)（1個(ge)月(yue)內(nei)）：反相柱(zhu)用純(chun)甲(jia)醇(chun)或乙腈(jing)密(mi)封保存(cun)，正相柱(zhu)用正己烷(wan)保(bao)存(cun)，確(que)保柱(zhu)內(nei)無氣(qi)泡；長(chang)期保(bao)存(cun)（超過1個(ge)月(yue)）：反相柱(zhu)用甲(jia)醇(chun)/水(shui)（90:10）保存(cun)，正相柱(zhu)用正己烷(wan)/異(yi)丙(bing)醇(chun)（95:5）保存(cun)，防止(zhi)固(gu)定(ding)相幹燥(zao)老(lao)化。保存(cun)時需(xu)將(jiang)色譜(pu)柱兩端用(yong)堵頭密(mi)封，置於(yu)陰涼(liang)幹燥(zao)處(chu)（溫(wen)度5-30℃），避(bi)免(mian)陽(yang)光直(zhi)射(she)。

 

通(tong)過以(yi)上規範維護(hu)，高(gao)效液相色(se)譜(pu)柱的(de)使(shi)用(yong)壽(shou)命可(ke)延長(chang)至1000-2000次分析，同(tong)時保(bao)障(zhang)檢(jian)測(ce)數(shu)據的準確(que)性和重(zhong)復(fu)性，降(jiang)低(di)使(shi)用(yong)成本。不同(tong)類型(xing)色(se)譜(pu)柱（如離(li)子(zi)交換柱(zhu)、手(shou)性柱）的(de)維護(hu)方(fang)法需(xu)結(jie)合(he)廠(chang)家(jia)說(shuo)明(ming)書調(tiao)整(zheng)，重(zhong)點關註(zhu)流動相兼(jian)容(rong)性和固(gu)定(ding)相特性。