液(ye)相色譜柱的常見(jian)故(gu)障(zhang)及(ji)排除方(fang)法(fa)

　　液(ye)相色譜柱的色譜柱在使(shi)用壹(yi)段(duan)時間(jian)後，會(hui)出(chu)現壹定的常見(jian)故(gu)障(zhang)，如(ru)果(guo)不(bu)能很好的判(pan)斷(duan)並(bing)解(jie)決就會(hui)影響色譜柱的使(shi)用效果，從而影響樣品(pin)的分析(xi)結(jie)果。當(dang)我們遇(yu)到(dao)這種情況(kuang)要怎(zen)麽辦呢。
　　液(ye)相色譜柱常見(jian)的幾種故(gu)障(zhang)判(pan)斷(duan)及(ji)排除方(fang)法(fa)：
　　1、當色譜柱壓高於(yu)正常值(zhi)，有三(san)種情況(kuang)：
　　（1）柱端過(guo)濾(lv)器堵塞(sai)。排除方(fang)法(fa)：拆下過(guo)濾(lv)器用硝(xiao)酸(suan)超聲(sheng)清(qing)洗(xi)
　　（2）長期使(shi)用柱端固定(ding)相板結(jie)。排除方(fang)法(fa)：挖掉板結(jie)部分(fen)修補柱端
　　（3）分析(xi)生化(hua)、染料等易汙(wu)染(ran)固定相的樣品(pin)。排除方(fang)法(fa)：采用保(bao)護(hu)柱
　　2、當色譜柱壓低於(yu)正常值(zhi)，可能是(shi)某(mou)連接處(chu)泄(xie)露，用高(gao)壓查找(zhao)泄(xie)漏處(chu)，拆(chai)下柱子適當擰緊(jin)或(huo)襯(chen)聚(ju)四(si)氟(fu)乙烯(xi)薄(bo)膜的方法排除。
　　3、當(dang)塔板數急劇下降，有兩(liang)種情況(kuang)：
　　（1）超(chao)齡服役排。排除方(fang)法(fa)：柱再(zai)生(sheng)或(huo)換(huan)柱
　　（2）柱被汙染。排除方(fang)法(fa)：清洗色(se)譜柱。
　　以上是(shi)壹(yi)些(xie)簡單的問題(ti)，下面再(zai)說(shuo)幾個比較復雜的案(an)例(li)
　　液(ye)相作為(wei)壹種高(gao)精(jing)密儀器，如(ru)果(guo)在使(shi)用過(guo)程中不(bu)按(an)照正確(que)操作的話(hua)，就容(rong)易導(dao)致壹(yi)些問題(ti)。其(qi)中zui常見(jian)的就是(shi)柱壓問題(ti)、漂(piao)移(yi)問題(ti)、峰(feng)型(xing)異常(chang)問(wen)題(ti)
　　柱壓問題(ti)  柱壓問題(ti)是(shi)使(shi)用液(ye)相色譜過(guo)程中需(xu)要密切(qie)註(zhu)意(yi)的地方，柱壓的穩定與(yu)色(se)譜圖峰(feng)形(xing)的好壞、柱效、分離效果及(ji)保(bao)留時間(jian)等密切(qie)相關。所(suo)謂(wei)柱壓穩定並(bing)不(bu)是(shi)指壓力值(zhi)穩定(ding)於(yu)壹個(ge)恒(heng)定值(zhi)而是(shi)指壓力波(bo)動(dong)範圍在(zai)50PSI之間(jian)（在(zai)使(shi)用梯(ti)度(du)洗脫時，柱壓平穩緩慢(man)的變化(hua)是(shi)允(yun)許(xu)的）。壓力過(guo)高、過(guo)低都屬(shu)於(yu)柱壓問題(ti)。
　　壓力過(guo)高 這是(shi)液(ye)相在使(shi)用中(zhong)zui常(chang)見(jian)的問題(ti)，指的是(shi)壓力突(tu)然(ran)升(sheng)高(gao)，壹(yi)般(ban)都是(shi)由(you)於(yu)流路(lu)中有(you)堵(du)塞(sai)的原因。此(ci)時(shi)，我(wo)們應該(gai)分段進行(xing)檢查(zha)。
　　(1).首(shou)先(xian)斷開(kai)真(zhen)空泵(beng)的入口處(chu)，此(ci)時(shi)PEEK管裏(li)充滿(man)液(ye)體，使(shi)PEEK管低於(yu)溶劑(ji)瓶，看液(ye)體是(shi)否(fou)自(zi)由(you)滴(di)下，如(ru)果(guo)液(ye)體不(bu)滴(di)或(huo)緩(huan)慢(man)滴(di)下，則是(shi)溶(rong)劑(ji)過(guo)濾(lv)頭(tou)堵塞。處(chu)理(li)方(fang)法(fa)：用30%的硝酸浸泡(pao)半個(ge)小時(shi)，在用超(chao)純(chun)水沖(chong)洗(xi)幹(gan)凈。如(ru)果(guo)液(ye)體自由滴(di)下，溶劑(ji)過(guo)濾(lv)頭(tou)正常，在(zai)檢查(zha)；
　　(2).打(da)開Purge閥(fa)，使(shi)流動(dong)相不(bu)經(jing)過(guo)柱子，如(ru)果(guo)壓力沒(mei)有(you)明(ming)顯下降，則是(shi)過(guo)濾(lv)白頭堵塞(sai)。處(chu)理(li)方(fang)法(fa)：將(jiang)過(guo)濾(lv)白頭取出(chu)，用10%的異丙醇(chun)超(chao)聲(sheng)半個(ge)小時(shi)。如(ru)果(guo)壓力降至100PSI以下，過(guo)濾(lv)白頭正常，在(zai)檢查(zha)；
　　(3).把(ba)色譜柱出(chu)口端取下，如(ru)果(guo)壓力不(bu)下降，則是(shi)柱子堵塞。處(chu)理(li)方(fang)法(fa)：如(ru)果(guo)是(shi)緩(huan)沖(chong)鹽(yan)堵(du)塞(sai)，則(ze)用95%的水沖(chong)至(zhi)壓力正常。如(ru)果(guo)是(shi)壹(yi)些(xie)強保(bao)留(liu)的物質(zhi)導(dao)致(zhi)堵(du)塞，則要用比(bi)現(xian)在流動(dong)相更(geng)強的流動(dong)相沖(chong)至(zhi)壓力正常。假如(ru)按(an)上面的方法長時間(jian)沖(chong)洗(xi)壓力都不(bu)下降，則可考(kao)慮(lv)將(jiang)柱子的進出(chu)口反過(guo)來接在儀器上，用流(liu)動(dong)相沖(chong)洗(xi)柱子。這時，如(ru)果(guo)柱壓仍(reng)不(bu)下降，只(zhi)有換(huan)柱子入口篩(shai)板，但壹旦(dan)操(cao)作不(bu)甚(shen)，很容(rong)易造(zao)成柱效下降，所以盡量少用。
　　壓力過(guo)低壓力過(guo)低的現象壹(yi)般(ban)是(shi)由(you)於(yu)系統泄漏，處(chu)理(li)方(fang)法(fa)：尋(xun)找(zhao)各(ge)個(ge)接(jie)口處(chu)，特(te)別是(shi)色(se)譜柱兩端的接口，把泄漏(lou)的地方旋緊即可。當(dang)然(ran)還(hai)有壹個(ge)原因就是(shi)泵(beng)裏(li)進了空氣，但此(ci)時(shi)表(biao)現(xian)的往(wang)往(wang)是(shi)壓力不(bu)穩(wen)，忽高忽低，更(geng)嚴(yan)重(zhong)壹點(dian)會導致泵(beng)無法(fa)吸上液(ye)體。處(chu)理(li)方(fang)法(fa)：打(da)開(kai)Purge閥，用3~5ml/min的流速沖(chong)洗(xi)，如(ru)果(guo)不(bu)行(xing)，則(ze)要用針筒(tong)在排空閥(fa)處(chu)借(jie)住外(wai)力(li)將(jiang)氣泡(pao)吸出(chu)。
　　漂(piao)移(yi)問題(ti)主要包(bao)括(kuo)基(ji)線漂(piao)移(yi)和保留時(shi)間(jian)漂(piao)移(yi)。
　　基線漂(piao)移(yi)壹般(ban)說來，機器剛起動(dong)時，基(ji)線容(rong)易漂(piao)移(yi)，大(da)概要半個(ge)小時(shi)的平衡(heng)時間(jian)，如(ru)果(guo)妳用了緩沖(chong)溶(rong)液(ye)或(huo)緩(huan)沖(chong)鹽(yan)，還(hai)有就是(shi)在(zai)低(di)波(bo)長下（220nm）平衡(heng)時間(jian)相對會(hui)比(bi)較(jiao)長，但如(ru)果(guo)妳在實(shi)驗(yan)過(guo)程中發(fa)現(xian)基線漂(piao)移(yi)，則妳要考(kao)慮(lv)下面的原因：
　　1、柱溫波(bo)動(dong)。解決方(fang)法(fa)：控(kong)制(zhi)好柱子和流動(dong)相的溫度，檢查(zha)是(shi)否(fou)有(you)打(da)開(kai)的窗戶(hu)或(huo)空(kong)調對著(zhe)柱溫箱。
　　2、流通池(chi)被汙染(ran)或(huo)有(you)氣體。解決方(fang)法(fa)：用甲醇或(huo)其(qi)他(ta)強極(ji)性溶劑(ji)沖(chong)洗(xi)流(liu)通(tong)池(chi)（斷開柱子）。如(ru)有(you)需要，可以用1N的硝酸（不(bu)要用鹽(yan)酸(suan)）。
　　3、紫(zi)外(wai)燈能量不(bu)足(zu)。解(jie)決方(fang)法(fa)：更(geng)換(huan)新(xin)的紫(zi)外(wai)燈
　　4、流動(dong)相汙染(ran)、變質(zhi)或(huo)由(you)低(di)品(pin)質(zhi)溶(rong)劑(ji)配(pei)成。解(jie)決方(fang)法(fa)：檢查(zha)流(liu)動(dong)相的組成，使(shi)用高(gao)品(pin)質(zhi)的化學試劑(ji)及(ji)HPLC級(ji)的溶劑(ji)。
　　5、樣(yang)品(pin)中(zhong)有(you)強保(bao)留(liu)的物質(zhi)（高(gao)K’值(zhi)）以饅(man)頭(tou)峰樣被洗(xi)脫出(chu)，從而表(biao)現(xian)出(chu)壹個逐步升(sheng)高的基線。解決方(fang)法(fa)：使(shi)用保(bao)護(hu)柱，如(ru)有(you)必要，在(zai)進樣(yang)之間(jian)。在(zai)分析(xi)過(guo)程中，定(ding)期(qi)用強溶(rong)劑(ji)沖(chong)洗(xi)柱子。
　　6、檢測(ce)器沒(mei)有(you)設定在(zai)zui大(da)吸收(shou)波(bo)長處(chu)。解(jie)決方(fang)法(fa)：將(jiang)波(bo)長調整(zheng)至zui大(da)吸收(shou)波(bo)長處(chu)
　　7、流(liu)動(dong)相的PH值(zhi)沒(mei)有(you)調節(jie)好。解(jie)決方(fang)法(fa)：加適量(liang)的酸或(huo)堿(jian)調至*PH值(zhi)
　　保留(liu)時(shi)間(jian)漂(piao)移(yi)保留時間(jian)重(zhong)現是(shi)液(ye)相性能好壞的壹個重(zhong)要標誌(zhi)，同(tong)壹種東(dong)西(xi)，兩次(ci)的保留時(shi)間(jian)相差不(bu)要超(chao)過(guo)15s，超過(guo)了半分(fen)鐘(zhong)可看(kan)做(zuo)保留(liu)時間(jian)漂(piao)移(yi)，就無法(fa)進行(xing)定性，妳要考(kao)慮(lv)以下原因：
　　1、溫(wen)控(kong)不(bu)當(dang)。解(jie)決方(fang)法(fa)：調好柱溫，檢查(zha)是(shi)否(fou)有(you)打(da)開(kai)的窗戶(hu)或(huo)空(kong)調對著(zhe)柱溫箱。
　　2、流動(dong)相比例(li)變化(hua)。解決方(fang)法(fa)：檢查(zha)四(si)元泵(beng)的比例(li)閥是(shi)否(fou)有(you)故(gu)障(zhang)
　　3、色譜柱沒(mei)有(you)平衡(heng)。解決方(fang)法(fa)：在每(mei)壹(yi)次(ci)運(yun)行之前給(gei)予(yu)足夠(gou)的時間(jian)平衡(heng)色譜柱
　　4、流速變化(hua)。解決方(fang)法(fa)：重(zhong)新(xin)設定流(liu)速
　　5、泵(beng)中(zhong)有氣泡(pao)。解(jie)決方(fang)法(fa)：、從泵(beng)中(zhong)除去(qu)氣泡(pao)
　　峰(feng)型(xing)異常(chang)問(wen)題(ti)峰(feng)型(xing)問題(ti)是(shi)液(ye)相的主要問(wen)題(ti)，在(zai)做液(ye)相過(guo)程中，我(wo)們就是(shi)要變換(huan)不(bu)同(tong)的條件來改(gai)善(shan)不(bu)好的峰型(xing)，對於(yu)各(ge)種各(ge)樣(yang)的異常峰(feng)，要區別對待(dai)，從主要問(wen)題(ti)出(chu)發(fa)，壹(yi)個壹(yi)個(ge)加以解決。
　　1、色(se)譜圖中(zhong)未(wei)出(chu)峰。解決方(fang)法(fa)：系統未(wei)進樣(yang)或(huo)樣(yang)品(pin)分(fen)解(jie)；泵(beng)未(wei)輸液(ye)或(huo)流(liu)動(dong)相使(shi)用不(bu)正確(que)；檢測(ce)器設置不(bu)正確(que)；針對以上情況(kuang)成因(yin)作相應調整(zheng)即可。
　　2、壹(yi)個(ge)峰或(huo)幾個峰是(shi)負(fu)峰(feng)。解(jie)決方(fang)法(fa)：流動(dong)相吸收(shou)本(ben)底高；進樣(yang)過(guo)程中進入(ru)空氣；樣(yang)品(pin)組(zu)分(fen)的吸收(shou)低於(yu)流動(dong)相。3、所有(you)峰均(jun)為(wei)負(fu)峰(feng)。解(jie)決方(fang)法(fa)：信號電纜接反或(huo)檢測(ce)器輸出(chu)極(ji)性設置顛倒(dao)；光(guang)學裝置(zhi)尚(shang)未(wei)達到(dao)平衡(heng)。
　　4、所有峰均為(wei)寬峰。解(jie)決方(fang)法(fa)：系統未(wei)達到(dao)平衡(heng)；溶解樣品(pin)的溶劑(ji)極(ji)性比流動(dong)相差很多；色譜柱尺(chi)寸(cun)及(ji)類(lei)型(xing)選擇(ze)不(bu)正確(que)；色譜柱或(huo)保(bao)護(hu)柱被汙染或(huo)柱效降低(di)；溫(wen)度變化(hua)造成的影響。、
　　5、所出(chu)峰比預想的小。解(jie)決方(fang)法(fa)：樣品(pin)黏(nian)度(du)過(guo)大(da)；進樣(yang)品(pin)故(gu)障(zhang)或(huo)進樣(yang)體積誤(wu)差；檢測(ce)器設置不(bu)正確(que)．定量(liang)環(huan)體積不(bu)正確(que)；檢測(ce)池(chi)汙染；檢測(ce)器燈出(chu)現問題(ti)。
　　6、出(chu)現雙(shuang)峰(feng)或(huo)肩(jian)峰(feng)。解(jie)決方(fang)法(fa)：進樣(yang)量過(guo)大(da)；樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)過(guo)高；保護(hu)柱或(huo)色(se)譜柱柱頭堵塞；保護(hu)拄(zhu)或(huo)色(se)譜柱汙染或(huo)失(shi)效；柱塌陷或(huo)形(xing)成短(duan)通(tong)道(dao)。
　　7、前伸峰(feng)。解(jie)決方(fang)法(fa)：進樣(yang)量或(huo)樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)高；溶(rong)解(jie)樣品(pin)的溶劑(ji)較(jiao)流動(dong)相極(ji)性強；保(bao)護(hu)柱或(huo)色(se)譜柱汙染或(huo)失(shi)效。
　　8、拖尾峰。解決方(fang)法(fa)：柱超載(zai)，降低(di)樣品(pin)量(liang)；增(zeng)加柱直徑采用較(jiao)高(gao)容(rong)量的固定相；峰幹(gan)擾(rao)，對樣(yang)品(pin)進行(xing)清潔過(guo)濾(lv)；調整(zheng)流動(dong)相；矽羥(qiang)基作用，加(jia)入(ru)三乙胺(an)，用堿(jian)致(zhi)鈍化柱增(zeng)加緩沖(chong)液(ye)或(huo)鹽(yan)的濃度降(jiang)低(di)流動(dong)相pH值(zhi)；柱內燒結(jie)不(bu)銹(xiu)鋼失(shi)效，更(geng)換(huan)燒結(jie)不(bu)銹(xiu)鋼；加在(zai)線過(guo)濾(lv)器，對樣(yang)品(pin)進行(xing)過(guo)濾(lv)；死(si)體積或(huo)柱外(wai)體積過(guo)大(da)，將(jiang)連接點(dian)降至zui低；盡可能使(shi)用內徑(jing)較(jiao)細(xi)的連接管；柱效下降，更(geng)換(huan)柱子；采用保(bao)護(hu)柱，對柱子進行(xing)再(zai)生(sheng)。
　　9、出(chu)現平頭峰。解決方(fang)法(fa)：檢測(ce)器設置不(bu)正確(que)；進樣(yang)體積太(tai)大(da)或(huo)樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)太高(gao)。
　　10、出(chu)現鬼(gui)峰。解決方(fang)法(fa)：進樣(yang)閥殘余峰，在每(mei)次(ci)進完(wan)樣(yang)後用充(chong)足(zu)的時間(jian)來平衡(heng)和清洗系統；樣品(pin)中(zhong)存在未(wei)知物(wu)，改(gai)進樣(yang)品(pin)的預處(chu)理(li)；流(liu)動(dong)相汙染(ran)，更(geng)換(huan)新(xin)流(liu)動(dong)相，盡可能現配(pei)現(xian)用，隔(ge)夜的流動(dong)相再(zai)次(ci)使(shi)用時(shi)要過(guo)濾(lv)；盡可能使(shi)用HPLC級(ji)試劑(ji)；流(liu)路(lu)中有(you)小的氣泡(pao)，打(da)開(kai)Purge閥(fa)，加大(da)流(liu)速排除。
　　以上內容(rong)只(zhi)是(shi)對液(ye)相色譜中出(chu)現的常見(jian)的問題(ti)進行(xing)了分析(xi)，當然(ran)在我(wo)們實(shi)際(ji)應用當(dang)中(zhong)還(hai)會遇到(dao)更(geng)多的其它問(wen)題(ti)，在(zai)故障排除時(shi)要遵(zun)守(shou)以下原則：壹(yi)次只(zhi)改(gai)變壹(yi)個因素，確(que)定假定(ding)因(yin)素與(yu)問(wen)題(ti)之間(jian)的；如(ru)果(guo)通過(guo)更(geng)換(huan)組(zu)件(jian)來排查故(gu)障(zhang)時要註(zhu)意(yi)將(jiang)拆下的完(wan)好組(zu)件(jian)裝回原(yuan)位，避(bi)免(mian)浪費；養(yang)成良(liang)好的記錄習(xi)慣(guan)，這是(shi)成功(gong)進行(xing)故障排除的關鍵。總(zong)之，在使(shi)用液(ye)相色譜時壹(yi)定(ding)要註(zhu)意(yi)樣品(pin)的前處(chu)理(li)與(yu)儀(yi)器的正確(que)操作和(he)保養(yang)。